In-Cell Western檢測細胞纖連蛋白

摘要： 目的:利用In-Cell Western技術(shù)建立檢測細胞纖連白(cFN)的方法.方法:對微孔培養(yǎng)的成骨樣細胞進行固定封閉后,使用單克隆抗體對FN進行標記,經(jīng)紅外熒光二抗育后使用Odysssey系統(tǒng)對細胞進行掃描成像和數(shù)據(jù)分析.在此基礎(chǔ)之上優(yōu)化了固定劑、通透化、封閉劑和一抗?jié)舛?果:免疫印跡法證實了In-Cell Western方法檢測的特異性,當MG-63細胞密度低于90%匯合度(細胞數(shù)約1.6×104/孔)時,信號與細胞密度呈現(xiàn)較好的線性關(guān)系,最低每孔4×103個MG-63細胞的cFN可被檢出.結(jié)論:成功地建立了一種快速、經(jīng)濟且高通量的cFN檢測方法并將其應(yīng)用于細胞外基質(zhì)研究. （共3頁）