聯(lián)合酶解法結合UPLC Q-TOF高分辨質(zhì)譜檢測重組水蛭素蛋白的二硫鍵結構

摘要： 采用聯(lián)合酶切法結合UPLC Q-TOF高分辨質(zhì)譜解析重組水蛭素蛋白的復雜二硫鍵交聯(lián)結構。首先從蛋白水平驗證重組水蛭素蛋白是否含有游離半胱氨酸，包括高分辨質(zhì)譜表征相對分子質(zhì)量和定量檢測游離巰基；然后利用單一酶解法標注每個或每組二硫鍵在蛋白序列中所處的位置；最后根據(jù)單酶所測結果，設計混合酶切的方式確定具體的二硫鍵配對方式，并利用二硫蘇糖醇還原法加以驗證，最終確證重組水蛭素蛋白的二硫... （共10頁）