正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)化千金藤屬植物的DALP反應(yīng)體系

摘要： 目的建立一套穩(wěn)定的千金藤植物DALP反應(yīng)體系,為開(kāi)展該屬植物的DALP分子標(biāo)記奠定基礎(chǔ).方法采用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),以云南地不容Stephania yunnanensesLo與地不容Stephania epigaeaLo基因組DNA為模板,對(duì)DALP反應(yīng)程序的重要參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化.結(jié)果最佳的反應(yīng)體系為20μL,包含模板DNA2.0μL,2.5 mmol/L的MgCl22.5μL,2.5 mmol/L的dNTPs 2.0μL,5 pmol/L的選擇性引物1μL,5 pmol/L的反向引物3μL,0.5 U/μL的Taq酶5μL,10×Buffer 2.0μL,滅菌超純水2.5μL.結(jié)論該DALP應(yīng)用反應(yīng)體系穩(wěn)定、可靠、重現(xiàn)性好,可有效的地應(yīng)用于千金藤植物的種間及居群間分類鑒定. （共4頁(yè)）