臭椿酮誘導(dǎo)人黑色素瘤A375細胞凋亡及其機制研究

摘要： 為研究臭椿酮(Ailanthone,AIL)誘導(dǎo)人黑色素瘤A375細胞凋亡的作用及作用機制,以人黑色素瘤A375細胞為研究對象,采用MTT法測定AIL對人黑色素瘤A375細胞生長增殖的抑制作用。用倒置相差顯微鏡觀察AIL對A375細胞形態(tài)的影響,用熒光倒置顯微鏡觀察Hoechst 33258染色后AIL對A375細胞核的影響,用Annexin V-FITC/PI雙染法檢測AIL誘導(dǎo)A375細胞凋亡的作用,用分光光度法檢測caspase-3和caspase-9的活性,Western blot檢測p-PI3Kβ(Ser1070),PI3Kβ,p-Akt(Ser473)和Akt蛋白表達水平的變化,接著用PI3K抑制劑LY294002進行干預(yù),進一步驗證AIL對PI3K/Akt信號通路及細胞凋亡的影響。實驗結(jié)果表明,AIL能夠明顯抑制A375細胞增殖,使A375細胞數(shù)目變少、附著力和透光性減弱,AIL能夠誘導(dǎo)A375細胞凋亡,使其細胞核染色質(zhì)發(fā)生固縮并呈現(xiàn)高亮,且使A375細胞早期及晚期凋亡率均增加,AIL作用后能夠使caspase-3和caspase-9活性增加,AIL能夠抑制PI3K和Akt蛋白磷酸化,從而使PI3K/Akt信號通路失活。較AIL單獨作用,AIL和LY294002共同作用后對PI3K和Akt蛋白磷酸化的抑制作用增強且誘導(dǎo)凋亡作用增加,進一步說明AIL通過失活PI3K/Akt信號通路來誘導(dǎo)A375細胞凋亡。 （共7頁）