旱柳SRAP-PCR體系的建立與優(yōu)化
浙江林學(xué)院學(xué)報(bào)
頁(yè)數(shù)： 5 2010-12-15
摘要： 為了豐富柳樹(shù)分子標(biāo)記的手段,以旱柳Salix matsudana為材料,通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)法,獲得適于旱柳的相關(guān)序列擴(kuò)增多態(tài)性(sequence-related amplified polymorphism,SRAP)-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction,PCR)體系;對(duì)SRAP-PCR擴(kuò)增過(guò)程中的2次退火溫度進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果如下:優(yōu)化反應(yīng)體系,25.00μL反應(yīng)液中,含20.84nkat的Taq酶,2.00μL Mg2+(25.00mmol·L-1),2.50μL堿基混合物(脫氧核糖核苷酸dNTPs,各2.50mmol·L-1),1.50μL引物(20.00μmol·L-1),100.00ng DNA模板,2.50μL10×Taq酶緩沖液。擴(kuò)增程序,94℃2.0min;94℃1.0min,38℃1.0min,72℃1.5min,5個(gè)循環(huán);94℃1.0min,54℃1.0min,72℃1.5min,30個(gè)循環(huán);72℃10.0min。經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)檢測(cè),特征性條帶清晰,信息量大,完全可以用于旱柳基因組的研究分析。 （共5頁(yè)）
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