杉木SRAP-PCR體系優(yōu)化

摘要： 為建立杉木SRAP-PCR反應(yīng)體系,利用L16(45)正交設(shè)計(jì)對(duì)影響杉木SRAP-PCR反應(yīng)體系的Mg2+、dNTPs、引物、Taq酶和DNA濃度5種因素的4個(gè)水平進(jìn)行優(yōu)化實(shí)驗(yàn),結(jié)合正交直觀分析和方差分析,對(duì)影響反應(yīng)較大的Mg2+、dNTPs和引物濃度進(jìn)行單因素實(shí)驗(yàn),最終確定杉木SRAP-PCR最佳的反應(yīng)體系為:在20μL的PCR反應(yīng)體系中,Mg2+濃度為2.25 mmol/L、dNTPs為0.15 mmol/L、引物濃度為0.4μmol/L、Taq酶為1.5μmol/min、模板DNA為60 ng,10×PCR Buffer 2μL,不足部分用雙蒸水補(bǔ)充至20μL。PCR反應(yīng)程序的兩步最適退火溫度第1步為35℃,第2步為53℃。利用上述反應(yīng)體系進(jìn)行杉木PCR擴(kuò)增,能得到清晰、穩(wěn)定的條帶。 （共6頁(yè)）