杉木SSR-PCR體系優(yōu)化

摘要： SSR-PCR反應(yīng)體系優(yōu)化是杉木SSR標(biāo)記研究的基礎(chǔ)。利用正交L16(45)設(shè)計實驗對杉木SSR-PCR反應(yīng)體系的Mg2+、dNTPs、引物、Taq酶和DNA濃度5個因素的4個水平進行優(yōu)化試驗。并在正交直觀分析和方差分析的基礎(chǔ)上,分別對Mg2+、dNTPs進行單因素確定。獲得的最佳反應(yīng)體系為:在20μL反應(yīng)體系中,Mg2+濃度為1.0mmol/L,引物濃度為0.25μmol/L,dNTPs濃度為0.15 mmol/L,Taq酶為0.05 U/μL,DNA為30 ng,10×PCR Buffer2μL,不足部分用雙蒸水補齊至20μL。在最佳反應(yīng)體系的基礎(chǔ)上,采用單因素實驗確定了引物的最佳退火范圍為63~53℃。利用此反應(yīng)體系對10個F1代杉木材料及其親本,進行4對SSR標(biāo)記進行PCR擴增并電泳檢測,其結(jié)果清晰、穩(wěn)定。說明此體系適合進一步的杉木SSR研究工作。 （共6頁）