基于In-Cell Western對Ryanodine受體2檢測方法的建立

摘要： In-Cell Western技術(shù)是基于近紅外激光成像系統(tǒng)而開發(fā)的檢測技術(shù),可應用于大分子ryanodine受體2(Ry R2)蛋白的檢測。本研究通過對In-Cell Western固定劑的選擇、細胞通透化、封閉液的選擇、抗體工作濃度和心肌細胞密度等方面進行優(yōu)化,建立心肌細胞Ry R2蛋白檢測的InCell Western方法,并分別用SGF和Verapamil以及免疫細胞化學技術(shù)對研究結(jié)果及方法進行了驗證。優(yōu)化后的In-Cell Western參數(shù):H9C2細胞的種板密度選擇1×104個/孔,選擇甲醛作為固定劑,細胞經(jīng)過Triton X-100洗脫液通透化處理,選擇酪蛋白作為封閉液,選擇1∶500稀釋的Ry R2一抗工作濃度。應用優(yōu)化的參數(shù)檢測心肌細胞Ry R2蛋白,并用前期已被證明能顯著提高心肌細胞Ry R2蛋白熒光值的土茯苓黃酮和Verapamil進行驗證,同時與免疫組化方法檢測心肌細胞Ry R2蛋白相比,檢測結(jié)果一致。表明本文建立的In-Cell Western方法檢測大分子功能蛋白Ry R2是可行的。 （共7頁）