PCR反應(yīng)體系要根據(jù)檢測(cè)或擴(kuò)增的目的片段不同而不同,一般含有:10×PCR緩沖液、dNTP、正反向引物、模板DNA、MgCl2溶液、TaqDNA聚合酶和無菌雙蒸水等。在冰浴條件下,按順序?qū)⒏鞒煞职幢壤尤?.2mL無菌離心管中(圖6-1)。圖6-1加樣...[繼續(xù)閱讀]

    將上述混合液在低速離心機(jī)(500～800r/min)上離心30s后,即置PCR儀上,設(shè)置好相應(yīng)的PCR反應(yīng)程序,儀器將自動(dòng)進(jìn)行擴(kuò)增(圖6-2、圖6-3)。反應(yīng)結(jié)束,關(guān)閉PCR擴(kuò)增儀,從PCR擴(kuò)增儀中取出PCR產(chǎn)物,放置于4℃待電泳檢測(cè),或置于-20℃長(zhǎng)期保存。PCR反應(yīng)的一...[繼續(xù)閱讀]

    瓊脂糖凝膠電泳是用瓊脂糖作為支持介質(zhì)的一種電泳方法,是分離和純化DNA片段最重要的技術(shù),不同的DNA分子量大小及構(gòu)型不同,電泳時(shí)的泳動(dòng)率就不同,從而分出不同的條帶。(一)瓊脂糖凝膠制備以1%瓊脂糖凝膠制備為例。稱取0.5g瓊脂...[繼續(xù)閱讀]

    在樣品處理過程中,應(yīng)設(shè)立陽性對(duì)照、陰性對(duì)照和空白對(duì)照。(1)取已知陽性樣本為模板作為陽性對(duì)照。(2)取正常的陰性樣本為模板作為陰性對(duì)照。(3)取等體積的水代替樣品為模板作為空白對(duì)照。...[繼續(xù)閱讀]

    在紫外燈下觀察,陽性對(duì)照會(huì)出現(xiàn)一條相應(yīng)大小的DNA片段,陰性對(duì)照和空白對(duì)照沒有該核酸帶。目的片段DNA存在,被檢DNA樣品則在一定的范圍內(nèi)顯示出熒光條帶,其大小與陽性對(duì)照樣品相同,此時(shí)判斷PCR反應(yīng)為陽性;無帶或者條帶的大小與...[繼續(xù)閱讀]

    (一)PCR反應(yīng)程序設(shè)置溫度與時(shí)間的設(shè)置:在標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)中采用三溫度點(diǎn)法,雙鏈DNA在90～95℃變性,再迅速冷卻至40～60℃,引物退火并結(jié)合到靶序列上,然后快速升溫至70～75℃,在TaqDNA聚合酶的作用下,使引物鏈沿模板延伸。1.變性溫度與時(shí)間變...[繼續(xù)閱讀]

    計(jì)算機(jī)一臺(tái),顯微鏡(配備顯微鏡CCD攝像頭)一臺(tái),打印機(jī)一臺(tái),遠(yuǎn)程會(huì)診系統(tǒng)軟件一套及網(wǎng)站服務(wù)器,并通過網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)連接而組成。...[繼續(xù)閱讀]

    (一)開機(jī)打開電腦主機(jī)電源開關(guān),顯示器上會(huì)出現(xiàn)如下界面(初始界面)(圖7-1)。圖7-1初始界面(二)運(yùn)行軟件雙擊桌面上圖標(biāo),輸入用戶名和密碼,選擇點(diǎn)擊“登錄網(wǎng)絡(luò)版”,進(jìn)入軟件正常工作界面(圖7-2)。圖7-2登錄界面登錄選擇說明:軟件具...[繼續(xù)閱讀]

    草魚出血病是危害草魚(圖8-1)、青魚養(yǎng)殖的主要病害,己列入水產(chǎn)苗種產(chǎn)地檢疫的必檢目錄。已知草魚出血病的病原是草魚呼腸弧病毒(Grasscarpreovirus,GCRV),也稱為草魚出血病病毒(Grasscarphemorrhagevirus,GCHV),是一種具有高度傳染性的魚類病...[繼續(xù)閱讀]

    錦鯉皰疹病毒病是鯉魚和錦鯉的一種急性、接觸性傳染病,對(duì)錦鯉、鯉魚危害均極為嚴(yán)重。該病多發(fā)于春、秋季,潛伏期14d。錦鯉皰疹病毒可感染任何年齡的錦鯉與鯉魚,傳播迅速,病魚出現(xiàn)癥狀24～48h后開始死亡(水溫低于18℃或高于3...[繼續(xù)閱讀]